細胞名稱：人風濕性關(guān)節(jié)滑膜成纖維細胞永生化

培養(yǎng)條件：成纖維細胞培養(yǎng)體系  

生長狀態(tài)：貼壁生長

備注：原代細胞永生化，提供免疫熒光鑒定報告

人源 肺微血管內(nèi)皮細胞

人源 II型肺泡上皮細胞

人源 氣管上皮細胞

人源 氣管平滑肌細胞

人源 支氣管上皮細胞

人源 支氣管平滑肌細胞

人源 肺成纖維細胞

人源 肺動脈內(nèi)皮細胞

人源 肺動脈平滑肌細胞

人源 心肌細胞

人源 主動脈內(nèi)皮細胞

人源 心肌成纖維細胞

人源 心臟微血管內(nèi)皮細胞

人源 主動脈瓣膜間質(zhì)細胞

人源 冠狀動脈內(nèi)皮細胞

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人源 食管上皮細胞

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人源 小腸粘膜上皮細胞

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人源 結(jié)腸粘膜上皮細胞

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人源 直腸成纖維細胞

人源 肝成纖維細胞

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人源 膽囊成纖維細胞

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人源 腎小管上皮細胞

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人源 腎小球內(nèi)皮細胞

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人源 腮腺腫瘤細胞

人源 扁桃體間質(zhì)細胞

人源 頜下腺囊腫細胞

人源 甲狀腺微血管內(nèi)皮細胞細胞培養(yǎng)問題----沉淀

當排除了污染后，細胞培養(yǎng)基的渾濁通常可以解釋為金屬、蛋白質(zhì)和其他培養(yǎng)基成分的沉淀。沉淀物可能對細胞健康有害，因為他們可能通過整合作用等過程去除營養(yǎng)物質(zhì)和其他需要的成分，從而改變培養(yǎng)基成分。

沉淀的原因

溫度變化

溫度是細胞培養(yǎng)中沉淀的主要原因之一。當暴露于端溫度變化時，高分子量的血漿蛋白會從溶液中沉降。熱失活和凍融循環(huán)會促進蛋白質(zhì)的變性和沉淀。由于液體或復溶培養(yǎng)基在每次使用之間保持冷藏狀態(tài)，鹽可能會沉淀出來，特別是10倍或其他濃縮液中析出。

失水引起的濃度變化

如果培養(yǎng)基存在蒸發(fā)，培養(yǎng)基組分（包括鹽）的濃度將增加。在培養(yǎng)基的表面特別容易形成晶體沉淀。

鈣鹽

在制備無血清培養(yǎng)基時，組分的添加順序可能會導致不溶性分子的形成。鈣鹽特別容易沉淀。例如，CaCl2和MgSO4在溶液中反應形成CaSO4晶體。高壓滅菌和pH值不穩(wěn)定可能會加劇這一問題。

金屬元素補充劑

銅、鐵和鋅金屬元素是細胞生長所必需的，是無血清培養(yǎng)基的重要補充劑。其他血清成分的缺失可能會導致這些金屬在培養(yǎng)基中沉淀，產(chǎn)生一個對細胞有毒的環(huán)境。銅和鋅在氧化條件下更加容易沉淀。

污染

培養(yǎng)基渾濁可能是細菌或真菌污染造成的。

細胞培養(yǎng)中對沉淀的故障排除

溫度

有關(guān)培養(yǎng)基的最佳儲存和處理，應參閱制造商指南。避免重復的凍融循環(huán)。

鈣鹽

在逐個加入其他培養(yǎng)基組分之前，先將CaCl2單獨溶解在去離子水中。

濕度

確保燒瓶和培養(yǎng)皿不存在蒸發(fā)。監(jiān)測培養(yǎng)箱的濕度，密封培養(yǎng)器皿，防止干燥。

其他金屬

加入鐵結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白可防止鐵在培養(yǎng)基中沉淀。

污染

丟棄被污染的細胞并對培養(yǎng)箱體進行消毒。遵循良好的實驗室措施以避免污染。

有目的的沉淀

盡管通常在細胞培養(yǎng)中不希望有沉淀，但是沉淀可以用作上清液中蛋白質(zhì)的純化策略。例如，硫酸銨沉淀法有時被稱為“鹽析"技術(shù)，用于從雜交瘤上清液或血清中純化抗體。

細胞培養(yǎng)做為生物學研究最基礎的技術(shù)之一，可以說是滲透科研界的方方面面。工欲善其事，必先利其器。細胞好不好，就看你懂不懂細胞培養(yǎng)的各種技術(shù)了。

?  原代培養(yǎng)

從原代組織中分離細胞的常用的方法是酶解法（胰蛋白酶和膠原酶）。

用無菌的解剖刀和剪子將組織剪成3~4mm小片，用平衡液（無鈣鎂離子）清洗組織碎片后去除上清液，并加入0.25%的胰蛋白酶（Trypsin，100mg組織加入1ml胰蛋白酶）或者膠原酶（Collagenase，50~200單位/ml），孵育4-18h。離心取上清后，用平衡液清洗幾次后，用*培養(yǎng)基懸浮細胞，進行培養(yǎng)。

?  傳代培養(yǎng)

依據(jù)細胞生長的特點，傳代方法有3種：

1. 懸浮生長細胞傳代（離心法）

將懸浮細胞離心（1000 rpm， 3 min）去上清，收集沉淀物加新培養(yǎng)基，混勻后進行傳代培養(yǎng)。

2. 半懸浮生長細胞傳代（直接吹打法）

3.此類細胞（如Hela細胞）部分貼壁，但黏貼不牢，可用直接吹打法使細胞從瓶壁上脫落下來，進行傳代。

3. 貼壁生長細胞傳代（酶消化法）

去除瓶內(nèi)培養(yǎng)液后，加入1-2ml 0.25%的胰蛋白酶液（以消化液覆蓋整個瓶底為準）37℃靜置2-10min（顯微鏡下動態(tài)監(jiān)測）。移去蛋白酶液，加入培養(yǎng)液反復吹打瓶壁細胞，離心將細胞沉淀用培養(yǎng)液制成細胞懸液。吸取1/10—1/40細胞懸液，接種于含有適量新鮮培養(yǎng)液的新培養(yǎng)瓶中進行傳代培養(yǎng)。

    ......

細胞培養(yǎng)是一個不斷進步的過程，在平時做好積累，量變才會有質(zhì)變。

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