細(xì)胞名稱(chēng)：人膽囊上皮細(xì)胞永生化+GFP

培養(yǎng)條件：上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系  

生長(zhǎng)狀態(tài)：貼壁生長(zhǎng)

備注：原代細(xì)胞永生化，提供免疫熒光鑒定報(bào)告

人源 肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞

人源 II型肺泡上皮細(xì)胞

人源 氣管上皮細(xì)胞

人源 氣管平滑肌細(xì)胞

人源 支氣管上皮細(xì)胞

人源 支氣管平滑肌細(xì)胞

人源 肺成纖維細(xì)胞

人源 肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞

人源 肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

人源 心肌細(xì)胞

人源 主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞

人源 心肌成纖維細(xì)胞

人源 心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞

人源 主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞

人源 冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞

人源 冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

人源 頸動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞

人源 頸動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

人源 食管上皮細(xì)胞

人源 食管平滑肌細(xì)胞

人源 食管成纖維細(xì)胞

人源 胃粘膜上皮細(xì)胞

人源 胃平滑肌細(xì)胞

人源 胃成纖維細(xì)胞

人源 小腸粘膜上皮細(xì)胞

人源 小腸平滑肌細(xì)胞

人源 小腸成纖維細(xì)胞

人源 結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞

人源 結(jié)腸平滑肌細(xì)胞

人源 結(jié)腸成纖維細(xì)胞

人源 膽囊上皮（永生化）細(xì)胞

人源 膽囊上皮細(xì)胞

人源 肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞

人源 肝外膽管上皮細(xì)胞

人源 肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞

人源 肝星狀細(xì)胞

人源 肝竇內(nèi)皮細(xì)胞

人源 肝Kuffer細(xì)胞

人源 直腸成纖維細(xì)胞

人源 肝成纖維細(xì)胞

人源 直腸上皮細(xì)胞

人源 直腸平滑肌細(xì)胞

人源 膽囊微血管內(nèi)皮細(xì)胞

人源 膽囊成纖維細(xì)胞

人源 膽囊平滑肌細(xì)胞

人源 膽囊動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞

人源 食管癌細(xì)胞

人源 食管纖維瘤細(xì)胞

人源 腎小管上皮細(xì)胞

人源 腎小球系膜細(xì)胞

人源 腎小球內(nèi)皮細(xì)胞

人源 腎足細(xì)胞

人源 輸尿管上皮細(xì)胞

人源 輸尿管平滑肌細(xì)胞

人源 膀胱上皮細(xì)胞

人源 膀胱平滑肌細(xì)胞

人源 膀胱成纖維細(xì)胞

人源 前列腺上皮細(xì)胞

人源 前列腺成纖維細(xì)胞

人源 輸卵管成纖維細(xì)胞

人源 甲狀腺上皮細(xì)胞

人源 甲狀腺成纖維細(xì)胞

人源 胰腺星狀細(xì)胞

人源 胰島細(xì)胞

人源 腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞

人源 腎上腺包膜成纖維細(xì)胞

人源 扁桃體動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞

人源 扁桃體動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

人源 腮腺腫瘤細(xì)胞

人源 扁桃體間質(zhì)細(xì)胞

人源 頜下腺囊腫細(xì)胞

人源 甲狀腺微血管內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)問(wèn)題----沉淀

當(dāng)排除了污染后，細(xì)胞培養(yǎng)基的渾濁通?？梢越忉尀榻饘佟⒌鞍踪|(zhì)和其他培養(yǎng)基成分的沉淀。沉淀物可能對(duì)細(xì)胞健康有害，因?yàn)樗麄兛赡芡ㄟ^(guò)整合作用等過(guò)程去除營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和其他需要的成分，從而改變培養(yǎng)基成分。

沉淀的原因

溫度變化

溫度是細(xì)胞培養(yǎng)中沉淀的主要原因之一。當(dāng)暴露于端溫度變化時(shí)，高分子量的血漿蛋白會(huì)從溶液中沉降。熱失活和凍融循環(huán)會(huì)促進(jìn)蛋白質(zhì)的變性和沉淀。由于液體或復(fù)溶培養(yǎng)基在每次使用之間保持冷藏狀態(tài)，鹽可能會(huì)沉淀出來(lái)，特別是10倍或其他濃縮液中析出。

失水引起的濃度變化

如果培養(yǎng)基存在蒸發(fā)，培養(yǎng)基組分（包括鹽）的濃度將增加。在培養(yǎng)基的表面特別容易形成晶體沉淀。

鈣鹽

在制備無(wú)血清培養(yǎng)基時(shí)，組分的添加順序可能會(huì)導(dǎo)致不溶性分子的形成。鈣鹽特別容易沉淀。例如，CaCl2和MgSO4在溶液中反應(yīng)形成CaSO4晶體。高壓滅菌和pH值不穩(wěn)定可能會(huì)加劇這一問(wèn)題。

金屬元素補(bǔ)充劑

銅、鐵和鋅金屬元素是細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的，是無(wú)血清培養(yǎng)基的重要補(bǔ)充劑。其他血清成分的缺失可能會(huì)導(dǎo)致這些金屬在培養(yǎng)基中沉淀，產(chǎn)生一個(gè)對(duì)細(xì)胞有毒的環(huán)境。銅和鋅在氧化條件下更加容易沉淀。

污染

培養(yǎng)基渾濁可能是細(xì)菌或真菌污染造成的。

細(xì)胞培養(yǎng)中對(duì)沉淀的故障排除

溫度

有關(guān)培養(yǎng)基的最佳儲(chǔ)存和處理，應(yīng)參閱制造商指南。避免重復(fù)的凍融循環(huán)。

鈣鹽

在逐個(gè)加入其他培養(yǎng)基組分之前，先將CaCl2單獨(dú)溶解在去離子水中。

濕度

確保燒瓶和培養(yǎng)皿不存在蒸發(fā)。監(jiān)測(cè)培養(yǎng)箱的濕度，密封培養(yǎng)器皿，防止干燥。

其他金屬

加入鐵結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白可防止鐵在培養(yǎng)基中沉淀。

污染

丟棄被污染的細(xì)胞并對(duì)培養(yǎng)箱體進(jìn)行消毒。遵循良好的實(shí)驗(yàn)室措施以避免污染。

有目的的沉淀

盡管通常在細(xì)胞培養(yǎng)中不希望有沉淀，但是沉淀可以用作上清液中蛋白質(zhì)的純化策略。例如，硫酸銨沉淀法有時(shí)被稱(chēng)為“鹽析"技術(shù)，用于從雜交瘤上清液或血清中純化抗體。

細(xì)胞培養(yǎng)做為生物學(xué)研究最基礎(chǔ)的技術(shù)之一，可以說(shuō)是滲透科研界的方方面面。工欲善其事，必先利其器。細(xì)胞好不好，就看你懂不懂細(xì)胞培養(yǎng)的各種技術(shù)了。

?  原代培養(yǎng)

從原代組織中分離細(xì)胞的常用的方法是酶解法（胰蛋白酶和膠原酶）。

用無(wú)菌的解剖刀和剪子將組織剪成3~4mm小片，用平衡液（無(wú)鈣鎂離子）清洗組織碎片后去除上清液，并加入0.25%的胰蛋白酶（Trypsin，100mg組織加入1ml胰蛋白酶）或者膠原酶（Collagenase，50~200單位/ml），孵育4-18h。離心取上清后，用平衡液清洗幾次后，用*培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞，進(jìn)行培養(yǎng)。

?  傳代培養(yǎng)

依據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)的特點(diǎn)，傳代方法有3種：

1. 懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞傳代（離心法）

將懸浮細(xì)胞離心（1000 rpm， 3 min）去上清，收集沉淀物加新培養(yǎng)基，混勻后進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

2. 半懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞傳代（直接吹打法）

3.此類(lèi)細(xì)胞（如Hela細(xì)胞）部分貼壁，但黏貼不牢，可用直接吹打法使細(xì)胞從瓶壁上脫落下來(lái)，進(jìn)行傳代。

3. 貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞傳代（酶消化法）

去除瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液后，加入1-2ml 0.25%的胰蛋白酶液（以消化液覆蓋整個(gè)瓶底為準(zhǔn)）37℃靜置2-10min（顯微鏡下動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)）。移去蛋白酶液，加入培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，離心將細(xì)胞沉淀用培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液。吸取1/10—1/40細(xì)胞懸液，接種于含有適量新鮮培養(yǎng)液的新培養(yǎng)瓶中進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

     ......

細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)不斷進(jìn)步的過(guò)程，在平時(shí)做好積累，量變才會(huì)有質(zhì)變。

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